10%優(yōu)質(zhì)胎牛血清的配比步驟?，不要錯過  

以配制100mL10%胎牛血清培養(yǎng)基為例（可按比例縮放配體量，如配500mL則各組分按5倍增加），具體步驟如下：?  

（一）血清與培養(yǎng)基解凍?  

胎牛血清解凍：將冷凍的胎牛血清從-20℃冰箱取出，放入4℃冰箱緩慢解凍（解凍時間約12-24小時，根據(jù)血清體積調(diào)整，500mL血清約需24小時），嚴(yán)禁室溫快速解凍或37℃水浴解凍（避免血清中蛋白質(zhì)變性、營養(yǎng)成分破壞）；解凍過程中每隔6小時輕輕顛倒血清瓶1-2次，使血清成分均勻，防止局部沉淀。?  

基礎(chǔ)培養(yǎng)基準(zhǔn)備：將基礎(chǔ)培養(yǎng)基從4℃冰箱取出，室溫放置30分鐘（平衡至室溫，避免后續(xù)與血清混合時因溫差產(chǎn)生冷凝水，導(dǎo)致污染）；若基礎(chǔ)培養(yǎng)基為粉末狀，需按說明書配制（如1包DMEM粉末溶解于950mL無菌去離子水，加入NaHCO?調(diào)節(jié)pH，定容至1000mL后過濾滅菌），確保溶解充分、無顆粒。?  

（二）無菌配比操作?  

基礎(chǔ)培養(yǎng)基量取：在生物安全柜內(nèi)，用無菌25mL移液管吸取90mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基，緩慢注入無菌血清瓶中（注入時移液管靠近瓶壁，避免液體沖擊產(chǎn)生氣泡，氣泡易攜帶環(huán)境微生物）；若需添加雙抗，此時加入1mL青霉素-鏈霉素雙抗（100×濃度），輕輕顛倒血清瓶3-5次，使雙抗與培養(yǎng)基均勻混合。?  

胎牛血清添加：待血清解凍后，用無菌10mL移液管吸取10mL胎牛血清，緩慢加入上述基礎(chǔ)培養(yǎng)基中（血清與培養(yǎng)基體積比嚴(yán)格控制為1:9，確保終濃度為10%）；加入過程中避免血清沾附在血清瓶瓶口（若沾附，用75%乙醇棉簽擦拭消毒，防止污染），添加完成后輕輕顛倒血清瓶5-8次，使血清與培養(yǎng)基充分融合，混合過程避免劇烈振蕩（防止蛋白質(zhì)變性）。?  

（三）質(zhì)量驗證與分裝?  

外觀與無菌性檢查：配比完成后，觀察血清培養(yǎng)基外觀——應(yīng)為淡黃色透明液體，無渾濁、沉淀、絮狀物（若出現(xiàn)異常，可能為血清污染或解凍不當(dāng)，需廢棄）；取1mL混合液接種至無菌LB培養(yǎng)基（細(xì)菌培養(yǎng)）和Sabouraud培養(yǎng)基（真菌培養(yǎng)），37℃培養(yǎng)24-48小時，無菌落生長則無菌性合格（若用于細(xì)胞培養(yǎng)，可先接種少量敏感細(xì)胞，如HeLa細(xì)胞，培養(yǎng)24小時觀察細(xì)胞狀態(tài)，無異常再批量使用）。?  

分裝與保存：將合格的10%胎牛血清培養(yǎng)基按使用量分裝至無菌離心管或培養(yǎng)瓶中（如每次使用20mL則分裝為20mL/管），加蓋后用parafilm膜密封瓶口（防止保存過程中污染）；短期使用（1周內(nèi)）可存放于4℃冰箱，長期使用（1個月以上）需分裝后放入-20℃冰箱冷凍保存，避免整瓶反復(fù)凍融（建議單次分裝量為1-2次細(xì)胞培養(yǎng)用量）。